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粉虱拟青霉优良菌株的筛选
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粉虱拟青霉(Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ
ａｌｅｕｒｏｃａｎｔｈｕｓ)是从茶园中罹病黑刺粉虱(Ａｌｅｕｒｏｃａｎｔｈｕｓ
ｓｐｉｎｉｆｅｒｕｓ Ｑｕａｉｎｔａｎｃｅ)虫尸上分离获得的一种新的昆虫病原真菌，经鉴定为一新种。目前，有多种拟青霉是重要的昆虫病原真菌，有的种类如粉质拟青霉(Ｐ．ｆａｒｉｎｏｓｕｓ)、玫烟色拟青霉(Ｐ．ｆｕｍｏｓｏｒｏｓｅｕｓ)等已开始应用于防治多种害虫。经对粉虱拟青霉的研究表明，该菌分布广泛，在浙江、福建、安徽、陕西各省茶园中均有发现，对黑刺粉虱、椰圆蚧有较强的致病力。为了探索利用该菌进行黑刺粉虱的生物防治，笔者对该菌进行了一系列研究，其中进行了不同菌株的筛选试验。现将试验结果初报如下。
一、材料和方法
1．材料
(1)试验菌株及菌株制备
粉虱拟青霉从茶园感病死亡的黑刺粉虱上分离纯化获得，按常规方法保种。供试菌株有：ＰＺｈ、ＰＺａ、ＰＧ、ＰＡｓ、ＰＦｆ，分别为采自浙江杭州、浙江安吉、广东、安徽十字铺、福建福安的野生菌株。
(2)培养基 PDA培养基：去皮马铃薯200ｇ，加水煮沸20ｍｉｎ，纱布过滤，加入葡萄糖20ｇ、琼脂20ｇ、蒸馏水1000ｍL，加热溶解。
SDA培养基：蛋白胨10g、葡萄糖20g、琼脂20g、蒸馏水1000mL，加热溶解。
(3)供试虫 田间采集健康的１～3龄黑刺粉虱幼虫。
2．方法
(1)生长速率测定
挑取各菌株点植于ＰＤＡ、ＳＤＡ平板上，设3次重复，置于24℃恒温箱中培养，分别于3、7、14、21天后测量菌落直径。
(2)孢子发芽率测定
取各菌株一级菌种斜面培养物，用01%吐温80洗脱孢子，配置成孢子悬浮液，涂于凹玻片内ＰＤＡ上，调节浓度，使在400倍显微镜下每视野的孢子数在100个以内。将凹玻片放入保湿培养皿中，在19℃下培养，40ｈ后镜检发芽孢子数。设3次重复。
(3)对黑刺粉虱致病力的测定 用0.1%吐温80洗下各菌株斜面菌种孢子，分别配成孢子浓度为1×１０８个／ｍL的孢子悬浮液。用孢子悬浮液喷湿叶背黑刺粉虱虫体后，将虫叶放入培养皿内保湿，置于24℃恒温箱中培养，20天后检查对黑刺粉虱幼虫的寄生率。设3次重复，每重复30头虫以上。
二、结果与分析
1．各菌株在不同培养基上的生长速率 5种菌株在ＰＤＡ、ＳＤＡ上的生长速率见表1，从表中可知，各菌株在ＰＤＡ上生长均较ＳＤＡ上快。在两种培养基上，都是以菌株Ｐ-Ｚａ生长最快，培养21天后在ＰＤＡ上菌落直径为45.2ｍｍ，在ＳＤＡ上为36.1ｍｍ。其次为Ｐ-Ｇ菌株和Ｐ-Ｚｈ菌株。这三者与另两个菌株间有显著差异。
2．各菌株的孢子发芽率 5种菌株孢子发芽率的试验结果见表2，从表中可以看出，菌株ＰＺａ的发芽率最高，与其他4个菌株间有极显著差异。
由于培养温度较低(为19℃)，各菌株孢子发芽率都较低。
3．各菌株对黑刺粉虱幼虫的致病力 5种菌株对黑刺粉虱幼虫的致病力存在差异，从表3可以看出，20天后寄生率以菌株P-Zh最高(63.7%)，其次为菌株Ｐ-Ｚａ(62.5%)，寄生率最低的是菌株Ｐ-Ａｓ(42.6%)，前两者与后者间差异极显著。
对害虫具有较高的致病性、自然生活力强是优良菌株必须具备的特点。从以上试验结果综合分析来看，菌株ＰＺａ具有生长速率快、孢子发芽率高、致病力强的特点，因此，是筛选出的优良菌株。
三、小结与讨论
1．粉虱拟青霉是一种新发现的黑刺粉虱寄生菌，其分布广泛。本试验通过对不同生态区收集到的5种野生菌株进行生长速率、孢子发芽率、对黑刺粉虱幼虫的致病力的测定比较，筛选出相对生长速率快、孢子发芽率高、致病力强的菌株--Ｐ-Ｚａ菌株。该菌株为所选优良菌株，可作为生产菌种。
2．该菌产孢较慢，平板培养21天时各菌株均未大量产孢，本试验对各菌株的产孢量作了测定，未发现有差异。
3．本文采用的是常规方法从自然野生菌株中筛选优良菌株。今后试验可选择进行单孢选育、诱变育种或原生质体融合等技术选育菌种。